冷凍電鏡應用場景:
晶體結構解析。
絕對構型判定。
鹽與共晶區分。
混合物組分結構測定。
同分異構確定。
冷凍電子顯微鏡技術簡稱冷凍電鏡:應用冷凍固定技術,低溫下使用投射電子顯微鏡觀察樣品的顯微技術,從而得到生物大分子的結構。
電鏡觀察:樣品經過超低溫冷凍、斷裂、鍍膜制樣(噴金/噴碳)等處理后,通過冷凍傳輸系統放入電鏡內的冷臺即可進行觀察。其中,快速冷凍技術可使水在低溫狀態下呈玻璃態,減少冰晶的產生,從而不影響樣品本身結構,冷凍傳輸系統保證在低溫狀態下對樣品進行電鏡觀察。
1968年,AronKlug發現中心截面定理,提出可以通過三維物體不同角度的二維投影在計算機內進行三維重構來解析獲得物體的三維結構。根據這一原理,利用透射電鏡獲得生物樣品多個角度的放大電子顯微圖像,即有可能在計算機里重構出它的三維空間結構。在冷凍電子顯微學結構解析的具體實踐中,依據不同生物樣品的性質及特點,可以采取不同的顯微鏡成像及三維重構方法。
目前主要使用的幾種冷凍電子顯微學結構解析方法包括:電子晶體學、單顆粒重構技術、電子斷層掃描重構技術等,它們分別針對不同的生物大分子復合體及亞細胞結構進行解析。